做好纸层析鉴定转氨基作用实验的关键步骤有哪些

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做好纸层析鉴定转氨基作用实验的关键步骤有哪些

　　（一）实验目的：
1、学习氨基酸纸层析的基本原理.2、掌握氨基酸纸层析的操作原理.（二）实验原理：
转氨基作用是氨基酸代谢过程中的一个重要反应,在转氨酶的催化下,氨基酸的а-酮酸与α-酮基的互换反应称为转氨基作用.转氨基作用广泛地存在于机体各组织**中,是体内氨基酸代谢的重要途径.氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化,此酶催化氨基酸的α－氨基转移到另一α－酮基酸上.各种转氨酶的活性不同,其中肝脏的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化如下反应：
α—酮戊二酸 + 丙氨酸 
ALT
谷氨酸 + **酸
本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物,加肝匀浆保温后,用纸层析法检查谷氨酸的出现,以证明转氨基作用.纸层析属于分配层析.以滤纸为支持物,滤纸纤维与水亲合力强,水被吸附在滤纸的纤维素的纤维之间形成固定相.有机溶剂与水不相溶,把预分离物质加到滤纸的一端,使流动溶剂经此向另一端移动,这样物质随着流动相的移动进行连续、动态的不断分配.由于物质分配系数的差异,而使移动速度就不一样,在固定相中,分配趋势较大的组分,随流动相移动的速度就慢,反之,在流动相分配趋势较大的成分,移动速度快,最终不同的组分彼此分离,物质在纸上移动的速率可以用比值Rf表示：
物质在一定的溶液中的分配系数是一定的,故比值Rf也相对稳定,因此在同一层析体系中
可用Rf值来鉴定被分离的物质.（三）实验材料与仪器：试剂：
1、0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液.
2、0.2mol/L Na2HPO4溶液81ml与0.2mol/L NaH2PO4溶液19ml混匀,用蒸馏水稀释20倍.
3、0.1mol/L丙氨酸溶液称取丙氨酸0.891克,先溶于少量0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液中,以1.0 N NaOH仔 细调至pH7.4后,加磷酸盐缓冲液至100ml.
4 、0.1mol/Lα－酮戊二酸称取α－酮戊二酸1.461克,先溶于少量0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液中,以1.0 N NaOH仔细调至pH 7.4 后,加磷酸盐缓冲液至100ml.
5、0.1mol/L 谷氨酸溶液称取谷氨酸0.735克,先溶于少量0.01mol/LpH 7.4磷酸盐缓冲液中,以1.0 N NaOH仔细调至pH 7.4 后,加磷酸盐缓冲液至50 ml.6、0.5%茚三酮溶液称取茚三酮0.5克于100 ml**中溶解.
7、层析溶剂：将重蒸过的酚2份和水1份按比例混合后,放入分液漏斗中,震荡,静置24小时后分层,将下部酚层转移到瓶中备用.
仪器：玻璃匀浆器、10ml试管、培养皿、表面皿、沸水浴锅、37℃恒温水浴箱、9cm圆滤纸、烘箱、手术剪刀、分液漏斗.

层析法分离氨基酸的原理是?

二、原理
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分 配层析法,其中滤纸纤维上吸附的水是固定相 水是固定相,配层析法,其中滤纸纤维上吸附的水是固定相,展层用的有机溶剂是流动相 在层析时,有机溶剂是流动相.展层用的有机溶剂是流动相.在层析时,
将样品点在距滤纸一端约2～的某一处,将样品点在距滤纸一端约 3cm的某一处,的某一处 该点称为**； 该点称为**；然后在密闭容器中层析溶剂 沿滤纸的一个方向进行展层,沿滤纸的一个方向进行展层,这样混合氨基 酸在两相中不断分配.由于分配系数（ 酸在两相中不断分配.由于分配系数（Kd） 不同,结果它们分布在滤纸的不同位置上.不同,结果它们分布在滤纸的不同位置上.物质被分离后在纸层析图谱上的位置,物质被分离后在纸层析图谱上的位置,可用 比移值（ 来表示.比移值（Rf）来表示.所谓R 是指在纸层析中,所谓 f,是指在纸层析中,从**至氨基酸 停留点（又称为层析点）中心的距离（ ） 停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与 **至溶剂前沿的距离（ ）的比值.**至溶剂前沿的距离（Y）的比值.如图
**到层析点中心的距离 X Rf = = Y **到溶剂前沿的距离
在一定条件下（如温度、展层剂的组成、 在一定条件下（如温度、展层剂的组成、 层析纸质量等不变）,某种物质的R ）,某种物质的 层析纸质量等不变）,某种物质的 f 值是常 因此可作为定性依据.数,因此可作为定性依据.由于氨基酸无色,由于氨基酸无色,可利用茚三酮反应使 氨基酸层析斑点显色,从而作定性分析.氨基酸层析斑点显色,从而作定性分析.本 实验利用纸层析法分离氨基酸.实验利用纸层析法分离氨基酸.

纸层析法观察转氨基作用的实验计算应该怎么写？

实验计算

做好纸层析鉴定转氨基作用实验的关键步骤有哪些？为什么

（一）实验目的：
1、学习氨基酸纸层析的基本原理。 2、掌握氨基酸纸层析的操作原理。 （二）实验原理：
转氨基作用是氨基酸代谢过程中的一个重要反应，在转氨酶的催化下，氨基酸的а-酮酸与α-酮基的互换反应称为转氨基作用。转氨基作用广泛地存在于机体各组织**中，是体内氨基酸代谢的重要途径。氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化，此酶催化氨基酸的α－氨基转移到另一α－酮基酸上。各种转氨酶的活性不同，其中肝脏的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化如下反应：
α—酮戊二酸 + 丙氨酸 
ALT
谷氨酸 + **酸
本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，加肝匀浆保温后，用纸层析法检查谷氨酸的出现，以证明转氨基作用。纸层析属于分配层析。以滤纸为支持物，滤纸纤维与水亲合力强，水被吸附在滤纸的纤维素的纤维之间形成固定相。有机溶剂与水不相溶，把预分离物质加到滤纸的一端，使流动溶剂经此向另一端移动，这样物质随着流动相的移动进行连续、动态的不断分配。由于物质分配系数的差异，而使移动速度就不一样，在固定相中，分配趋势较大的组分，随流动相移动的速度就慢，反之，在流动相分配趋势较大的成分，移动速度快，最终不同的组分彼此分离，物质在纸上移动的速率可以用比值Rf表示：

物质在一定的溶液中的分配系数是一定的，故比值Rf也相对稳定，因此在同一层析体系中
可用Rf值来鉴定被分离的物质。 （三）实验材料与仪器： 试剂：
1、0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液。
2、0.2mol/L Na2HPO4溶液81ml与0.2mol/L NaH2PO4溶液19ml混匀,用蒸馏水稀释20倍。
3、0.1mol/L丙氨酸溶液称取丙氨酸0.891克,先溶于少量0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液中,以1.0 N NaOH仔 细调至pH7.4后, 加磷酸盐缓冲液至100ml。
4 、0.1mol/Lα－酮戊二酸称取α－酮戊二酸1.461克,先溶于少量0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液中，以1.0 N NaOH仔细调至pH 7.4 后，加磷酸盐缓冲液至100ml。
5、0.1mol/L 谷氨酸溶液称取谷氨酸0.735克,先溶于少量0.01mol/LpH 7.4磷酸盐缓冲液中，以1.0 N NaOH仔细调至pH 7.4 后, 加磷酸盐缓冲液至50 ml。 6、0.5%茚三酮溶液称取茚三酮0.5克于100 ml**中溶解。
7、层析溶剂：将重蒸过的酚2份和水1份按比例混合后，放入分液漏斗中，震荡，静置24小时后分层，将下部酚层转移到瓶中备用。
仪器：玻璃匀浆器、10ml试管、培养皿、表面皿、沸水浴锅、37℃恒温水浴箱、9cm圆滤纸、烘箱、手术剪刀、分液漏斗。

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如何用纸层析法对氨基酸进行定性测定

纸层析法（paper chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术,可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定.纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法,其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相,展层用的有机溶溶剂是流动相.在层析时,将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处,该点称为**；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层,这样混合氨基酸在两相中不断分配,由于分配系数（Kd）不同,结果它们分布在滤纸的不同位置上.物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用比移值（rate of flow,Rf）来表示.所谓Rf,是指在纸层析中,从**至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与**至溶剂前沿的距离（Y）的比值：
在一定条件下某种物质的Rf值是常数.Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关.

如何用纸层析法对氨基酸进行定性和定量的测定

纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。在层析时，将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为**；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配，由于分配系数不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。
纸层析法是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。

氨基酸的rf值影响因素

1.因为氨基酸的侧链R基不同,极性强弱不同,所以rf值不同.比如在正丁醇为主要展开剂的层析中,phe肯定比ala的rf值大. 2、影响因素主要有：物质结构与极性,层析溶剂,PH(溶剂、滤纸和样品的PH值),温度,滤纸的质地是否均匀,薄厚是否适当,纤维的松紧度是否适中,展层的方式(上行、下行)等.

如何用纸层析法对氨基酸进行定性测定

纸层析法（paper chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术,可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定.纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法,其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相,展层用的有机溶溶剂是流动相.在层析时,将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处,该点称为**；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层,这样混合氨基酸在两相中不断分配,由于分配系数（Kd）不同,结果它们分布在滤纸的不同位置上.物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用比移值（rate of flow,Rf）来表示.所谓Rf,是指在纸层析中,从**至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与**至溶剂前沿的距离（Y）的比值：
在一定条件下某种物质的Rf值是常数.Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关.