DTT用来保护蛋白的终浓度是什么

百科常识
鲍留冠
2023-10-03 21:58:03
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今天宠物迷的小编给各位宠物饲养爱好者分享dtt的作用的宠物知识，其中也会对DTT用来保护蛋白的终浓度是什么进行专业的解释，如果能碰巧解决你现在面临的宠物相关问题，别忘了关注本站哦，现在我们开始吧！

DTT用来保护蛋白的终浓度是什么

因为有些蛋白有半胱氨酸的存在，所以会形成很多-SH键来维持蛋白质的高级结构又因为-SH键具有很强的还原性，为了避免-SH被**而造成蛋白失去活性，所以需要加入DTT来保护-SH键不被还原掉。但是DTT量太高的话又会破坏掉二硫键。也就是说DTT浓度太低起不到保护作用，浓度太高又会破坏结构。所以如果一些蛋白需要添加的话一般是建议在0.5mM~1.5mM之间。以摩尔数计算，5-10倍的量来保护-SH。如果蛋白报存buffer中含有15%左右的**，对蛋白具有很好的稳定作用。补充一点：如果dtt和蛋白摩尔比例比例增大到1：100，DTT就能破坏2硫键了，这时对应的浓度一般在10mM左右。

DTT作用是什么

是有效的杀虫剂。为20世纪上半叶防止农业病虫害，减轻疟疾伤寒等蚊蝇传播的疾病危害起到了不小的作用。 DDT又叫滴滴涕，二二三，化学名为双对氯苯基三氯乙烷(Dichlorodiphenyltrichloroethane)，化学式(ClCH)CH(CCl)，是有机氯类杀虫剂。中文名称从英文缩写DDT而来，为白色晶体，不溶于水，溶于煤油，可制成*剂，是有效的杀虫剂，也是不易分解的有机农药。应用 DTT的用途之一是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。巯基化DNA末端硫**在溶液中趋向于形成二聚体，特别是在存在氧气的情况下。这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验（如DNA在生物感应器中的固定）的效率；而在DNA溶液中加入DTT，反应一段时间后除去，就可以降低DNA的二聚化。 DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部（溶剂不可及）的二硫键，这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性（高温加热或加入变性剂，如6M **胍、8M 尿素或1% SDS）。反之，根据DTT存在情况下，二硫键还原速度的不同，可以判断其包埋程度的深浅。

DTT作用是什么

DTT的作用是什么，它对蛋白有哪些影响

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DTT是否既能激活一些酶又能使一些酶失活,为什么?

二硫苏糖醇（Dithiothreitol，简称为DTT）

CAS号 3483-12-3
PubChem 446094
SMILES SC[C@@H](O)[C@H](O)CS

DTT是一种小分子有机还原剂。其还原状态下为线性分子，被**后变为包含二硫键的六元环状结构。二硫苏糖醇的名字衍生自苏糖（一种四碳单糖）。DTT的异构体为Dithioerythritol（DTE），即DTT的**结构。

DTT是一种很强的还原剂，其还原性很大程度上是由于其**状态六元环（含二硫键）的构象稳定性。它的**还原电势在pH为7时为-0.33伏。二硫苏糖醇对一个典型的二硫键的还原是由两步连续的巯基-二硫键交换反应所组成。

其中，第一步反应所形成的中间态很不稳定，因为DTT上的第二个巯基趋向于与被**的硫**连接，使中间态很快被转化为DTT的环状**结构，从而完成对二硫键的还原。

DTT的还原力受pH值的影响，只在pH值大于7的情况下能够发挥还原作用。这是因为只有脱去质子的硫醇盐负离子（-S–）才具有反应活性，硫醇（-SH）则没有；而巯基的pKa一般为～8.3。

DTT的用途之一是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。巯基化DNA末端硫**在溶液中趋向于形成二聚体，特别是在存在氧气的情况下。这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验（如DNA在生物感应器中的固定）的效率；而在DNA溶液中加入DTT，反应一段时间后除去，就可以降低DNA的二聚化。

DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键(能够保护正常晶体蛋白所含的半胱氨酸等成分不受**修饰，减少其变性可能性)。但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部（溶剂不可及）的二硫键，这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性（高温加热或加入变性剂，如6M **胍、8M 尿素或1% SDS）。反之，根据DTT存在情况下，二硫键还原速度的不同，可以判断其包埋程度的深浅。
=============================回答=================================
巯基保护试剂如DTT、巯基乙醇对酶活力有显著的激活作用，但是同时DTT可以逆转激活作用,因为它同时也是蛋白质变性剂，破坏二硫键。变性目的蛋白,破坏二硫键能帮助打开蛋白质的二硫键，使待分析的蛋白质分离成为单一的蛋白亚基。DTT是一种硫醇还原剂，当其浓度达到50mM时可促进大多数蛋白的半胱氨酸残基被还原。

DTT 二硫苏糖醇的作用是什么啊？

DTT 是二硫键的还原剂,还可以保持酶中-SH的还原态. 一般来说它影响蛋白的构象，从而对蛋白的活性有影响，如果蛋白分子内无二硫键就不会影响结构或活性。但是，有些蛋白（酶）只有在DTT或Cys存在时活性增加。

镍柱纯化蛋白为什么加pmsf和dtt

PMSF为蛋白酶***，在纯化过程中，为了防止细菌本身的蛋白酶降解待纯化的目的蛋白，通常在破碎菌体，上柱的过程中会加PMSF。使用时请注意防护，有毒。
DTT为二硫苏糖醇，一般加在平衡上柱缓冲液和洗脱缓冲液中，纯化的目的蛋白天然结构如果有二硫键，那么在纯化这类蛋白时，推荐加入DTT，但用镍柱纯化时，浓度要低，1mM就够了。